對(duì)話陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)，解讀研究背后的故事
近期，陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)在血液學(xué)國(guó)際期刊BLOOD發(fā)表了一項(xiàng)題為“Nanobody-based Naturally Selected CD7-Targeted Chimeric Antigen Receptor T Cell Therapy for Acute Myeloid Leukemia”的研究[1]，該研究首次報(bào)道了基于納米抗體的CD7 CAR-T在急性髓系白血?。?/span>AML）患者中的安全性及初步療效，研究結(jié)果標(biāo)志著AML治療領(lǐng)域的又一重大突破，引起學(xué)界的廣泛關(guān)注與熱烈討論。
借此機(jī)會(huì)，“醫(yī)學(xué)界”特邀陸道培醫(yī)院陸佩華院長(zhǎng)、張弦教授和楊君芳教授做客《研究者說(shuō)》直播間，一同聊聊研究相關(guān)的故事。
探索AML治療新前沿，CD7 CAR-T突破患者治療困境
“AML患者預(yù)后較差，具有高度異質(zhì)性和高侵襲性，其臨床治療一直存在挑戰(zhàn)，尤其是對(duì)于復(fù)發(fā)/難治性（R/R）AML患者而言，傳統(tǒng)手段療效的局限性凸顯了臨床對(duì)創(chuàng)新治療方案的迫切需求。”陸佩華院長(zhǎng)介紹道，“近年來(lái)，細(xì)胞免疫治療發(fā)展迅猛，自2017年首款CAR-T產(chǎn)品獲批以來(lái)，CAR-T細(xì)胞療法在急性淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療中展現(xiàn)出顯著成效。然而，在AML治療領(lǐng)域，CAR-T細(xì)胞療法仍處于早期臨床試驗(yàn)階段，尚未得到獲批。”
為此，陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)在AML治療領(lǐng)域邁出了堅(jiān)實(shí)的步伐，近年來(lái)開(kāi)展了多項(xiàng)CAR-T細(xì)胞療法治療AML的相關(guān)研究，前期研究成果揭示了CD7 CAR-T可作為AML治療中的潛在突破口，持續(xù)優(yōu)化靶點(diǎn)選擇策略及細(xì)胞制備工藝或能為深陷治療困境的AML患者開(kāi)辟新的道路。
創(chuàng)新性dVHH NS7CAR-T或可為R/R AML帶來(lái)新選擇
“傳統(tǒng)的CAR結(jié)構(gòu)依賴于單鏈片段抗體（scFv）作為抗原結(jié)合域，但scFv存在一些局限性，如免疫原性較高、穩(wěn)定性較差等。近年來(lái)，納米抗體作為一種新型的抗原結(jié)合域逐漸受到關(guān)注。納米抗體是羊駝科動(dòng)物體內(nèi)天然存在的重鏈抗體的可變結(jié)構(gòu)域，具有分子量小、穩(wěn)定性高、免疫原性低等優(yōu)點(diǎn)。此外，納米抗體的模塊化特性使其易于進(jìn)行基因工程改造，可靈活構(gòu)建包含多個(gè)納米抗體的復(fù)合結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤抗原的多表位、多靶點(diǎn)的識(shí)別和協(xié)同作用。這種在抗體篩選和組合方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，為優(yōu)化CAR-T療法的特異性和治療效果開(kāi)辟了新的技術(shù)路徑，顯著提升了CAR-T細(xì)胞在復(fù)雜腫瘤微環(huán)境中的靶向性和殺傷效率。”張弦教授分享道。
基于此，陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了一種基于納米抗體的CD7靶向CAR-T細(xì)胞（dVHH NS7CAR-T），并進(jìn)行了相關(guān)探索：
臨床前研究：高效擴(kuò)增與精準(zhǔn)殺傷
臨床前研究發(fā)現(xiàn)dVHH對(duì)CD7具有極高的特異性和親和力。dVHH NS7CAR-T細(xì)胞在體外培養(yǎng)中具有顯著的擴(kuò)增優(yōu)勢(shì)，其擴(kuò)增倍數(shù)約為scFv NS7CAR-T細(xì)胞的3倍（23.9倍 vs 8.1倍，P=0.024）。在細(xì)胞毒性方面，dVHH NS7CAR-T細(xì)胞與scFv NS7CAR-T細(xì)胞在不同效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞比例下對(duì)KG1a靶細(xì)胞的殺傷能力相當(dāng)。在小鼠異種移植模型中，接受dVHH NS7CAR-T細(xì)胞治療的小鼠在治療后第8天即顯示出腫瘤顯著縮小，而接受磷酸鹽緩沖液或?qū)φ?/span>T細(xì)胞治療的小鼠則表現(xiàn)出快速的腫瘤生長(zhǎng)和疾病進(jìn)展。
圖2：scFv NS7CAR-Ts和dVHH NS7CAR-Ts之間的擴(kuò)增、細(xì)胞存活率、CAR陽(yáng)性率和CD4：CD8比值
I期臨床研究：療效與安全性雙突破
在I期臨床研究中，共納入10例CD7陽(yáng)性（表達(dá)率≥50%）的R/R AML患者，患者前期治療的中位數(shù)為8，其中7例患者曾接受過(guò)異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT）。入組患者接受了兩種劑量水平的dVHH NS7CAR-T細(xì)胞治療（5×105/kg和1×106/kg）。
表1：患者基線特征
研究的主要觀察指標(biāo)包括完全緩解（CR）率、CR伴不完全血液學(xué)恢復(fù)（CRi）率、微小殘留病灶（MRD）陰性CR率以及緩解持續(xù)時(shí)間、安全性[包括細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征（ICANS）以及其他不良事件的發(fā)生率和嚴(yán)重程度]等。
療效結(jié)局
陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)觀察到dVHH NS7CAR-T細(xì)胞療法治療AML展現(xiàn)出了突破性的潛力。楊君芳教授介紹道：“7例（70%）患者在治療后4周內(nèi)達(dá)到了CR或CRi，其中6例患者達(dá)到了MRD陰性CR。所有未達(dá)緩解（NR）或復(fù)發(fā)的患者均出現(xiàn)了CD7表達(dá)的丟失。在7例達(dá)到CR/CRi的患者中，3例曾接受過(guò)allo-HSCT的患者在CAR-T治療后約2個(gè)月接受了第二次allo-HSCT。其中1例患者在治療后第401天仍保持無(wú)白血病狀態(tài)，另外2例患者分別在第241天和第776天因非復(fù)發(fā)相關(guān)原因死亡。未接受鞏固性allo-HSCT的4例患者中，3例患者在治療后第47天、第83天和第89天復(fù)發(fā)，且復(fù)發(fā)時(shí)均檢測(cè)到CD7表達(dá)的丟失。1例患者因肺部感染在治療后第48天死亡。”
圖3：患者緩解結(jié)局
安全性結(jié)局
安全性分析顯示，dVHH NS7CAR-T細(xì)胞治療的耐受性良好。楊君芳教授談道：“80%的患者出現(xiàn)了輕度CRS，其中7例患者為1級(jí)，1例為2級(jí)。只有2例患者出現(xiàn)3級(jí)CRS，并很快控制，但未發(fā)生神經(jīng)毒性。在7例既往接受過(guò)allo-HSCT的患者中，1例在CAR-T治療后出現(xiàn)了輕度皮膚移植物抗宿主病（GVHD）。此外，2例患者在治療后出現(xiàn)肺部感染，但未出現(xiàn)病毒再激活。”
表2：患者的不良反應(yīng)
CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增和CD7表達(dá)
在治療后外周血中CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增和細(xì)胞因子水平方面，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CAR-T細(xì)胞在治療后第17天（11天~21天）達(dá)到峰值，中位峰值為64.68%（40.08%~92.02%）。通過(guò)定量PCR檢測(cè)，CAR-T細(xì)胞基因拷貝數(shù)在治療后第21天（14天~21天）達(dá)到峰值，中位峰值為2.72×105拷貝/μg基因組DNA（0.671×105~5.41×105拷貝/μg）。CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的中位持續(xù)時(shí)間為39天（27天~60天）。
在CD7表達(dá)方面，6例NR或復(fù)發(fā)的患者在CAR-T治療后均出現(xiàn)了CD7表達(dá)的丟失。其中5例患者在疾病進(jìn)展過(guò)程中，原始細(xì)胞擴(kuò)增的同時(shí)伴隨著CD7表達(dá)的丟失。1例患者在治療前骨髓中存在兩種不同的惡性細(xì)胞克隆，一種為CD7陽(yáng)性，另一種為CD7陰性。治療后，CD7陽(yáng)性克隆被清除，而CD7陰性克隆則持續(xù)存在并擴(kuò)增。
“研究中觀察到AML患者的CD7丟失比T細(xì)胞白血病患者更為頻繁，反映了淋系和髓系惡性腫瘤中CD7抗原表達(dá)的差異。抗原丟失已經(jīng)成為當(dāng)前CAR-T治療領(lǐng)域亟需攻克的關(guān)鍵性臨床挑戰(zhàn)，單一靶點(diǎn)CAR-T難以實(shí)現(xiàn)疾病的徹底根治。”針對(duì)研究中患者出現(xiàn)CD7表達(dá)的丟失，張弦教授談道，“納米抗體技術(shù)的模塊化設(shè)計(jì)為構(gòu)建雙靶點(diǎn)或多靶點(diǎn)CAR-T提供了技術(shù)可行性。未來(lái)需要進(jìn)一步挖掘AML特異性更強(qiáng)、表達(dá)更穩(wěn)定的新靶點(diǎn)，結(jié)合納米抗體高親和力、低免疫原性的特性開(kāi)發(fā)新型CAR-T，從而降低抗原丟失的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步突破當(dāng)前治療瓶頸。”
圖4：細(xì)胞擴(kuò)增結(jié)局
醫(yī)患協(xié)作帶來(lái)突破，CAR-T進(jìn)一步探索勢(shì)在必行
該研究證明了基于納米抗體的CD7靶向CAR-T細(xì)胞療法治療CD7陽(yáng)性AML患者的安全性和有效性。dVHH NS7CAR-T細(xì)胞在體外和體內(nèi)均展示出優(yōu)越的抗腫瘤活性和增殖能力，在臨床試驗(yàn)中取得了70%的CR/CRi率，且該療法的安全性良好，大多數(shù)患者僅出現(xiàn)輕度CRS，且未發(fā)生神經(jīng)毒性。然而，CD7表達(dá)的丟失是導(dǎo)致部分患者治療失敗的主要原因，提示在未來(lái)的治療中需要進(jìn)一步優(yōu)化靶點(diǎn)選擇和治療策略。
針對(duì)該研究結(jié)果，國(guó)際細(xì)胞和基因治療專家Maksim Mamonkin教授在BLOOD發(fā)表的同期述評(píng)[2]中也提及：該研究驗(yàn)證了CD7可作為AML患者亞群中可行的治療靶點(diǎn)，CD7 CAR-T細(xì)胞療法具有作為R/R AML患者移植橋梁的潛力，或可進(jìn)一步改變AML的治療格局。
陸佩華院長(zhǎng)進(jìn)一步總結(jié)道：“盡管該研究取得了令人鼓舞的初步結(jié)果，但仍存在一些局限性。首先，樣本量較小，限制了對(duì)療效和安全性的進(jìn)一步評(píng)估。其次，隨訪時(shí)間相對(duì)較短，無(wú)法全面評(píng)估長(zhǎng)期療效和潛在的遲發(fā)性不良事件。此外，CD7表達(dá)丟失的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究，以開(kāi)發(fā)出更有效的抗逃逸策略。未來(lái)的研究方向可能包括擴(kuò)大樣本量以進(jìn)一步驗(yàn)證dVHH NS7CAR-T療法的療效和安全性，探索CD7表達(dá)丟失的機(jī)制并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的應(yīng)對(duì)策略，以及評(píng)估該療法與其他治療方法（如異基因造血干細(xì)胞移植）的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值。此外，基于納米抗體的CAR-T療法在其他血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的應(yīng)用也值得進(jìn)一步探索。”
“當(dāng)然，這項(xiàng)突破性療法的成功絕非偶然——從靶點(diǎn)篩選、淋巴細(xì)胞采集時(shí)機(jī)的精準(zhǔn)把控，到化療預(yù)處理強(qiáng)度的動(dòng)態(tài)調(diào)整，乃至CAR-T細(xì)胞回輸后的并發(fā)癥管理，每個(gè)環(huán)節(jié)都凝聚著跨學(xué)科團(tuán)隊(duì)的協(xié)同創(chuàng)新。”陸佩華院長(zhǎng)強(qiáng)調(diào)，“此外，所有研究的進(jìn)展都是基于醫(yī)患間的深度信任——正是患者及家屬在絕境中給予的托付，驅(qū)動(dòng)著陸道培醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)不斷突破技術(shù)邊界。相信在大家的共同努力下，CAR-T療法在R/R AML治療領(lǐng)域?qū)⑷〉酶语@著的突破與進(jìn)展。”
專家簡(jiǎn)介
陸佩華 院長(zhǎng)
陸道培醫(yī)院醫(yī)療執(zhí)行院長(zhǎng)，北京陸道培血液病研究院院長(zhǎng)
畢業(yè)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)院，在美國(guó)內(nèi)布拉斯加醫(yī)學(xué)中心完成住院醫(yī)，畢業(yè)于美國(guó)斯坦福大學(xué)血液及腫瘤?？?/span>
美國(guó)腫瘤以及血液病?？茀f(xié)會(huì)認(rèn)證的血液及腫瘤專家，具有美國(guó)血液病專科醫(yī)生，腫瘤專科醫(yī)生執(zhí)照以及中國(guó)行醫(yī)執(zhí)照
首都醫(yī)科大學(xué)腫瘤學(xué)系第四屆系務(wù)委員會(huì)委員
中國(guó)非公醫(yī)療機(jī)構(gòu)協(xié)會(huì)第一屆常務(wù)理事
中國(guó)非公立醫(yī)療機(jī)構(gòu)協(xié)會(huì)血液病專業(yè)委員會(huì)優(yōu)秀主任委員
中國(guó)非公立醫(yī)療機(jī)構(gòu)協(xié)會(huì)生物技術(shù)與細(xì)胞應(yīng)用專業(yè)委員會(huì)常務(wù)委員
中國(guó)造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫(kù)專家委員會(huì)委員
中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）抗白血病聯(lián)盟專家委員會(huì)常務(wù)委員
中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)第一屆血液病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)常務(wù)委員
北京醫(yī)學(xué)教育協(xié)會(huì)第七屆理事會(huì)理事
醫(yī)學(xué)界價(jià)值醫(yī)療泰山獎(jiǎng)2021年度醫(yī)療管理獎(jiǎng)獲得者
榮獲德醫(yī)雙馨“2021人民好醫(yī)生年度人物”
張弦 教授
主任醫(yī)師，血液學(xué)博士
陸道培醫(yī)院普通血液科主任、HLA配型室主任(副院長(zhǎng)級(jí))
中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)第五屆血液腫瘤專業(yè)委員會(huì)造血干細(xì)胞移植與細(xì)胞治療學(xué)組委員
中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)血液科醫(yī)師分會(huì)第五屆委員會(huì)委員
中國(guó)研究型醫(yī)院學(xué)會(huì)細(xì)胞研究與治療學(xué)專業(yè)委員會(huì)委員
中國(guó)輸血協(xié)會(huì)人類組織抗原專業(yè)會(huì)專家組委員
北京市抗癌協(xié)會(huì)血液淋巴血液腫瘤專業(yè)委員會(huì)委員
北京癌癥防治學(xué)會(huì)紅細(xì)胞疾病專業(yè)委員會(huì)委員
河北省血液學(xué)會(huì)淋巴瘤專業(yè)委員會(huì)委員
廊坊市門(mén)診特殊疾病鑒定專家
廊坊市抗癌協(xié)會(huì)藥物臨床試驗(yàn)安全性評(píng)價(jià)專業(yè)委員會(huì)常務(wù)委員
擅長(zhǎng)各種良性惡性血液病的MICM（形態(tài)、免疫分型、染色體、融合基因、基因突變）綜合診斷，并根據(jù)相應(yīng)結(jié)果進(jìn)行高中低危分層，給以相應(yīng)個(gè)體化治療。特別是各型白血病的化療、靶向治療和免疫治療。熟悉淋巴瘤、骨髓瘤的診斷及治療。在復(fù)發(fā)/難治惡性血液病方面積累大量經(jīng)驗(yàn)。
國(guó)際學(xué)術(shù)交流：2018年至2020年，連續(xù)3次在美國(guó)血液學(xué)年會(huì)上做CAR-T治療相關(guān)的口頭報(bào)告
楊君芳 教授
陸道培醫(yī)院普通血液科主任
自2004年4月開(kāi)始從事血液病及細(xì)胞免疫治療臨床應(yīng)用及研究工作。2005年5月入職道培醫(yī)療集團(tuán)至今，一直從事血液病的診治及細(xì)胞免疫治療。擅長(zhǎng)血液系統(tǒng)良惡性疾病的診斷治療；血液系統(tǒng)惡性腫瘤的化療、靶向治療、CAR-T治療；自體骨髓移植。自2013年開(kāi)始研究CAR-T細(xì)胞的相關(guān)治療；2015年6月開(kāi)始在陸道培醫(yī)院將自體CD19-CAR-T廣泛應(yīng)用于臨床；隨后開(kāi)展CD22、CD19/22雙靶CAR-T、CD19/20雙靶CAR-T、BCMA-CAR-T、CD7-CAR-T、UCAR-T等多項(xiàng)臨床研究，均取得卓越的臨床療效
中國(guó)人體健康科技促進(jìn)會(huì)細(xì)胞免疫治療專業(yè)委員會(huì)委員
北京癌癥防治學(xué)會(huì)淋巴瘤免疫治療專業(yè)委員會(huì)第一屆委員會(huì)常務(wù)委員
廊坊市醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì)委員
國(guó)際交流：多次在國(guó)際會(huì)議上發(fā)表口頭報(bào)告，并在BLOOD等雜志發(fā)表了CAR-T相關(guān)的文章
參考文獻(xiàn)：
[1]Lu P, Zhang X, Yang J, Li J, Qiu L, Gong M, Wang H, Chen J, Liu H, Xiong M, Liu Y, Wang L. Nanobody-based naturally selected CD7-targeted CAR-T therapy for acute myeloid leukemia. Blood. 2025 Mar 6;145(10):1022-1033. doi: 10.1182/blood.2024024861.
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